En effektiv og rimelig prosess for klargjøring og ultrafiltrering av gjær som uttrykker rekombinante proteiner
Gjærekspresjon av eksogene gener kan ikke bare produsere rekombinante proteiner og peptider, antistoffer og vaksiner, cytokiner, vekstfaktorer, hormoner og andre bioaktive stoffer, men kan også brukes til å produsere industrielle enzymer, funksjonell mat og biologiske materialer, som har brede bruksutsikter .
Gjærekspresjonssystemet inkluderer to ofte brukte ekspresjonssystemer, det vil si saccharomyces cerevisiae ekspresjonssystem og metanotrofisk gjærekspresjonssystem. Metanolgjærekspresjonssystemet er det mest brukte gjærekspresjonssystemet for tiden, og Pichia er det mest brukte, som kan bruke metanol som karbon og energi. I tillegg kommer Hansens gjær, Sphaeroides og så videre.
Uansett hva slags gjærekspresjonssystem, er dets nedstrøms separasjons- og renseprosesser like, og den spesifikke prosessflyten tar gjærekspresjon av rekombinante proteiner og polypeptidmedisiner som et eksempel.
Guidling mikrofiltreringsmembrankassetter bruker åpen strømningskanal og tangentiell strømningsfiltreringsmodus, som effektivt kan behandle kompleks matevæske som gjærfermenteringsvæske og E. coli-crackingvæske ved høy hastighet, og kan sikre lineær forsterkning fra liten test til produksjonsskala. Kompakt modulær design, enkel rørledningstilkobling, uavhengighet og lesbarhet av systemet kan beskytte operatører og forhindre biologisk forurensning. Og ingen vedlikeholds- og rengjøringsverifisering. Derfor er den veldig egnet for avklaringstrinnet med tidlig nedstrømsbehandling.
Hovedformålet med UF/DF-prosessen er å fjerne urenheter og fortrenge buffere. Guidling ultrafiltreringsmembrankassett har god homogenitet av membranporestørrelse og sterk hydrofilisitet, noe som kan gi membranen høyere fluks og lavere proteinadsorpsjon, og optimert strømningskanaldesign, med mindre trykkfall, enkel materialoverføring og betydelig forkorte filtreringstiden. Dessuten er produktserien komplett og fleksibel for å møte behovene til ulike bruksområder i forskjellige skalaer. Derfor er den veldig egnet for UF/DF-trinnet for nedstrømsbehandling.
Følgende er brukssaken til Guidling membrankassetti gjærekspresjon av rekombinante proteiner.
Mikrofiltreringsavklaring
Vi brukte {{0}},11 kvadratmeter 0,22μm poremembrankassett for å klarne 1,5L gjærfermenteringsvæske (målproteinmolekylvekt 42-55 KD) ved mikrofiltrering. I hele prosessen med mikrofiltrering ble gjenvinningshastigheten for målprotein, turbiditetsendring og membranfluksutarming undersøkt.
0-17min er konsentrasjonsprosessen, 17-32min er vaske- og filtreringsprosessen. Under hele mikrofiltreringsprosessen økte TMP gradvis, væskeinnløpshastigheten forble uendret, og den gjennomsnittlige materialfluksen var 45LMH.
Turbiditeten til væsken var 600NTU før mikrofiltrering og 8NTU etter mikrofiltrering, og turbiditeten endret seg åpenbart.
Resultatene viste at utbyttet av målprotein var > 90%. Guidling Technology 0,22μm membrankassett er stabil og egnet for dette bruksscenarioet.
Ultrafiltreringskonsentrasjon
Ultrafiltreringskonsentrasjon av 1,5 L klaret væske (målproteinmolekylvekt 42-55kd) ble utført ved bruk av 0.11 kvadratmeter 10kd membrankassett. I hele prosessen med ultrafiltrering ble utvinningsgraden for målprotein, membranfluksutarming og vannfluksgjenvinningshastighet undersøkt.
Før og etter bruk kan gjenvinningsgraden til membranen nå 90%.
0-15min er konsentrasjonsprosessen, 15-18min er væskeutvekslingsprosessen. Under hele ultrafiltreringsprosessen økte TMP gradvis, væskeinnløpshastigheten forble uendret, og den gjennomsnittlige materialfluksen var 50LMH.
Resultatene viste at målproteinet var fullstendig fanget. Guidling Technology 10kd membrankassetter kan kjøre stabilt og er egnet for dette applikasjonsscenariet.
De fleste av de rekombinante proteinene uttrykt av gjær ble ikke sterkt uttrykt. Turbiditeten til den filtrerte væsken ble åpenbart redusert og proteingjenvinningshastigheten var høyere. Fordi den påfølgende kromatografitiden er for lang, vil den forårsake uønskede effekter på proteinet, for å forkorte den kromatografiske prøvetakingstiden, kan ett trinn med ultrafiltreringskonsentrasjon legges til, og målproteinet kan konsentreres raskt etter prøven, noe som kan oppnå formålet med å spare tid, redusere fyllmengden og dermed redusere produksjonskostnadene.
Guidling Technology-mikrofiltreringsmembrankassetter kan generelt redusere turbiditeten til matevæsken til mindre enn 20NTU, og oppfyller fullt ut behovene til påfølgende ultrafiltrering og kromatografi. Ultrafiltreringsgjenvinningsgraden for ultrafiltreringsmembrankassetter vil variere på grunn av forskjellige materialer, den generelle gjenvinningsgraden kan nå 90-95%.
Guidling Technology ønsker deg velkommen til å be om testsett for relatert evaluering.
Om Guidling
Guidling Technology er en nasjonal høyteknologisk bedrift som fokuserer på biofarmasøytika, cellekultur, rensing og konsentrasjon av biomedisin, diagnose og industrielle væsker. Vi har med suksess utviklet sentrifugalfilterenheter, ultrafiltrerings- og mikrofiltreringskassetter, virusfilter, TFF-system, dybdefilter, hulfiber osv. Som fullt ut oppfyller bruksscenarioene for biofarmasøytiske midler, cellekultur og så videre. Våre membraner og membranfiltre er mye brukt i konsentrasjon, ekstraksjon og separasjon av forfiltrering, mikrofiltrering, ultrafiltrering og nanofiltrering. Våre mange produktlinjer, fra små laboratoriefiltrering til engangsbruk til produksjonsfiltreringssystemer, sterilitetstesting, fermentering, cellekultur og mer, møter behovene til testing og produksjon. Guidling Technology ser frem til å samarbeide med deg!